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PCR耗材知識大科普,你想了解嗎
發布日期:2022/11/1 9:54:34
PCR是一種敏感和有效的方法,用于在短時間內將單拷貝的目標DNA序列擴增至數百萬拷貝。

因此用于PCR反應的塑料耗材必須避免存在污染物和抑制劑,同時又具有可保障最佳PCR效果的高質量。

01

塑料耗材組成

材料

PCR / qPCR耗材通常由聚丙烯制成,因為它是惰性的并且能夠承受熱循環過程中溫度的快速變化。聚丙烯的惰性性質使其對于反應物質的吸收降低至最小,確保獲取最佳的PCR結果。為了進一步保障在純度和生物兼容性方面的批次間一致性,應當在生產過程中使用全新未循環使用的醫學級或分子生物學級高品質聚丙烯原料。請注意,某些PCR / qPCR板邊框用更強的聚碳酸酯框 制成,以與高通量機器人應用兼容。

顏色

PCR管和板通常可提供多種不同的顏色形式,以便于對于樣品的視覺區分和鑒別,特別是在高通量實驗中。盡管耗材的顏色對DNA擴增沒有影響,但在設置實時PCR或qPCR 的反應時,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色耗材,以實現靈敏和準確的熒光檢測。

白色耗材通過阻止熒光折射出管(圖2A)來提高qPCR數據的靈敏度和一致性。折射被最小化時,更多的信號被反射回檢測器,從而增加信噪比(圖2B)。此外,白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊,避免被吸收或不一致地反射熒光信號,從而使重復實驗(圖1B)中的差異降至最低。在極少數情況下,如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強而過飽和,可以使用磨砂孔替代。

02

生產概況

防止灰塵和生物學污染物

為了避免可干擾DNA擴增的污染,PCR/qPCR塑料耗材應不含核酸酶和DNA的污染。盡管如高壓和輻射等滅菌方法可去除細菌和DNA酶,但這些方法并不能去除灰塵和DNA殘留。殘留的灰塵客戶可能會抑制PCR,而片段化的DNA依然可作為模板從而產生非特異性的擴增。

因此,在生產這些塑料耗材時,從制模到最終的包裝都必須在具有顆粒數量限制的設施環境中進行。例如,100,000級潔凈室允許在立方英尺空氣中不超過100,000個直徑≥0.5μm的顆粒。這些類型的設施符合國際標準化組織(如ISO 9001 )規定的嚴格指導原則,以防止灰塵和生物污染。

質量保證檢驗

為了確保質量,生產商可能需要對PCR/qPCR塑料耗材進行視覺或物理檢驗其完整性,以確保對于反應成分保護。可以執行物理測試來評估樣品孔的蒸發,密封和電連續性以檢查泄漏。對于生物測試,塑料耗材會進行某些DNA目標分子的qPCR擴增,以評估核酸酶和人類DNA的污染。生產商對于經歷過這些嚴格檢驗的PCR/qPCR塑料耗材可提供相應的檢測報告書。

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